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無(wú)菌室標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程與驗(yàn)收規(guī)范


無(wú)菌室標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程與驗(yàn)收規(guī)范


1.目的:本規(guī)程旨在為無(wú)菌操作及無(wú)菌室的保護(hù)提供一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程。
2.適用范圍:生測(cè)實(shí)驗(yàn)室
3.責(zé)任者:QC主管生測(cè)員
4.定義 無(wú)
5.安全注意事項(xiàng):嚴(yán)格無(wú)菌操作,防止微生物污染;操作人員進(jìn)入無(wú)菌室應(yīng)先關(guān)掉紫外燈。
6.規(guī)程:
6.1.無(wú)菌室應(yīng)設(shè)有無(wú)菌操作間和緩沖間,無(wú)菌操作間潔凈度應(yīng)達(dá)到10000級(jí),室內(nèi)溫度保持在20-24℃,濕度保持在45-60%。超凈臺(tái)潔凈度應(yīng)達(dá)到100級(jí)。
6.2.無(wú)菌室應(yīng)保持清潔,嚴(yán)禁堆放雜物,以防污染。
6.3.嚴(yán)防一切滅菌器材和培養(yǎng)基污染,已污染者應(yīng)停止使用。
6.4.無(wú)菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液,如5%的甲酚溶液,70%的酒精,0.1%的新潔爾滅溶液,等等。
6.5.無(wú)菌室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔,以保證無(wú)菌室的潔凈度符合要求。
6.6.需要帶入無(wú)菌室使用的儀器,器械,平皿等一切物品,均應(yīng)包扎嚴(yán)密,并應(yīng)經(jīng)過(guò)適宜的方法滅菌。
6.7.工作人員進(jìn)入無(wú)菌室前,必須用肥皂或消毒液洗手消毒,然后在緩沖間更換專用工作服,鞋,帽子,口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭雙手),方可進(jìn)入無(wú)菌室進(jìn)行操作。
6.8.無(wú)菌室使用前必須打開(kāi)無(wú)菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上,并且同時(shí)打開(kāi)超凈臺(tái)進(jìn)行吹風(fēng)。操作完畢,應(yīng)及時(shí)清理無(wú)菌室,再用紫外燈輻照滅菌20分鐘。
6.9.供試品在檢查前,應(yīng)保持外包裝完整,不得開(kāi)啟,以防污染。檢查前,用70%的酒精棉球消毒外表面。
6.10.每次操作過(guò)程中,均應(yīng)做陰性對(duì)照,以檢查無(wú)菌操作的可靠性。
6.11.吸取菌液時(shí),必須用吸耳球吸取,切勿直接用口接觸吸管。
6.12.接種針每次使用前后,必須通過(guò)火焰灼燒滅菌,待冷卻后,方可接種培養(yǎng)物。
6.13.帶有菌液的吸管,試管,培養(yǎng)皿等器皿應(yīng)浸泡在盛有5%來(lái)蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒,24小時(shí)后取出沖洗。
6.14.如有菌液灑在桌上或地上,應(yīng)立即用5%石碳酸溶液或3%的來(lái)蘇爾傾覆在被污染處至少30分鐘,再做處理。工作衣帽等受到菌液污染時(shí),應(yīng)立即脫去,高壓蒸汽滅菌后洗滌。
6.15.凡帶有活菌的物品,必須經(jīng)消毒后,才能在水龍頭下沖洗,嚴(yán)禁污染下水道。
6.16.無(wú)菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)。在超凈工作臺(tái)開(kāi)啟的狀態(tài)下,取內(nèi)徑90mm的無(wú)菌培養(yǎng)皿若干,無(wú)菌操作分別注入融化并冷卻至約45℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15ml,放至凝固后,倒置于30~35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí),證明無(wú)菌后,取平板3~5個(gè),分別放置工作位置的左中右等處,開(kāi)蓋暴露30分鐘后,倒置于30~35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí),取出檢查。100級(jí)潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過(guò)1個(gè)菌落,10000級(jí)潔凈室平均不得超過(guò)3個(gè)菌落。如超過(guò)限度,應(yīng)對(duì)無(wú)菌室進(jìn)行徹底消毒,直至重復(fù)檢查合乎要求為止。
7.參照:《藥品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法》《中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》中(無(wú)菌檢查法)章節(jié)中華人民共和國(guó)醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T0188.6-1995《藥品檢驗(yàn)操作規(guī)程》
8.分發(fā)部門:
質(zhì)量管理部 無(wú)菌室技術(shù)指導(dǎo)說(shuō)明:
    在獲得了無(wú)菌環(huán)境和無(wú)菌材料后,我們還要保持無(wú)菌狀態(tài),才能對(duì)某種特定的已知微生物進(jìn)行研究或利用它們的功能,否則外界的各種微生物很容易混入。外界不相干的微生物混入的現(xiàn)象,在微生物學(xué)中我們叫做污染雜菌。防止污染是微生物學(xué)工作中十分關(guān)鍵的技術(shù)。一方面是徹底滅菌,另一方面防止污染,是無(wú)菌技術(shù)的兩個(gè)方面。另外,我們還要防止所研究的微生物,特別是致病微生物或經(jīng)過(guò)基因工程改造了的本來(lái)自然界不存在的微生物從我們的實(shí)驗(yàn)容器中逃逸到外界環(huán)境中去。為了這些目的,在微生物學(xué)中,有許多措施。
    無(wú)菌室一般是在微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)專辟一個(gè)小房間??梢杂冒宀暮筒AЫㄔ?。面積不宜過(guò)大,約4—5平方米即可,高2.5米左右。無(wú)菌室外要設(shè)一個(gè)緩沖間,緩沖間的門和無(wú)菌室的門不要朝向同一方向,以免氣流帶進(jìn)雜菌。無(wú)菌室和緩沖間都必須密閉。室內(nèi)裝備的換氣設(shè)備必須有空氣過(guò)濾裝置。無(wú)菌室內(nèi)的地面、墻壁必須平整,不易藏污納垢,便于清洗。工作臺(tái)的臺(tái)面應(yīng)該處于水平狀態(tài)。無(wú)菌室和緩沖間都裝有紫外線燈,無(wú)菌室的紫外線燈距離工作臺(tái)面1米。工作人員進(jìn)入無(wú)菌室應(yīng)穿滅過(guò)菌的服裝,戴帽子。
    當(dāng)前無(wú)菌室多存在于微生物工廠,一般實(shí)驗(yàn)室則使用超凈臺(tái)。超凈臺(tái)其主要功能是利用空氣層流裝置排除工作臺(tái)面上部包括微生物在內(nèi)的各種微小塵埃。通過(guò)電動(dòng)裝置使空氣通過(guò)高效過(guò)濾器具后進(jìn)入工作臺(tái)面,使臺(tái)面始終保持在流動(dòng)無(wú)菌空氣控制之下。而且在接近外部的一方有一道高速流動(dòng)的氣簾防止外部帶菌空氣進(jìn)入。在條件較困難的地方,也可以用木制無(wú)菌箱代替超凈臺(tái)。無(wú)菌箱結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,便于移動(dòng),箱正面開(kāi)有兩個(gè)洞,不操作時(shí)用推拉式小門擋住,操作時(shí)可以將雙臂伸進(jìn)去。正面上部裝有玻璃,便于在內(nèi)部操作,箱內(nèi)部裝有紫外線燈,從側(cè)面小門可以放進(jìn)去器具和菌種等?! ?br>     無(wú)菌操作技術(shù)當(dāng)前不僅在微生物學(xué)研究和應(yīng)用上起著舉足輕重的作用,而且在許多生物技術(shù)中也


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